BCECF（酸形式，全称2',7'-双（羧乙基）-5（6）-羧基荧光素）是目前应用最广泛的比率型pH荧光探针，其化学结构以荧光素为母核，通过引入羧乙基与羧基修饰形成具有pH响应特性的分子骨架，CAS号为85138-49-4，分子量520.44，呈黄橙色固体状态。该试剂的核心特性是pH依赖性荧光响应，在低pH环境下荧光微弱，随pH升高荧光强度显著增强，其解离常数（pKa≈6.97）与活细胞胞质生理pH（7.2-7.4）高度匹配，可高灵敏度检测细胞内pH变化。作为膜非渗透性探针，BCECF酸需通过显微注射或刮擦加载法进入细胞，通过检测439nm与505nm双激发波长下535nm发射波长的荧光强度比值实现pH定量，有效规避单波长检测的干扰因素。

试剂信息

中文名称：2′,7′-双(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素；BCECF PH指示剂；

英文名称：2′,7′-Bis(2-carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein；BCECF,酸；BCECF acid；BCECF pH Indicators；BCECF Acid pH indicator

CAS号：85138-49-4

分子式：C27H20O11

分子量：520.44

闪点 ：318.3±27.8 °C

沸点：936.2±65.0 °C at 760 mmHg

极化度：49.8±0.5 10-24cm3

密度 ：1.6700

纯度：95%+

储存条件：-20℃避光干燥保存

核心特点

- 比率型荧光响应：激发光谱随pH变化发生特征偏移，在439nm（参比）与505nm（pH响应）双激发下发射波长稳定于535nm，通过荧光强度比值定量pH，消除探针浓度、细胞密度等干扰。

- 适配生理pH范围：pH 6.0-8.0区间内荧光比值与pH呈良好线性关系，pKa≈6.97完美覆盖活细胞酸碱平衡关键区间，可精准捕捉酸中毒（pH≈6.5）至碱中毒（pH≈7.8）的变化。

- 优良理化特性：中性pH下带4-5个负电荷，水溶性优异，在DMSO中溶解度可达62.5mg/mL；抗光漂白能力强，连续激发时荧光信号稳定性高。

- 细胞内高滞留性：进入细胞后因带电特性无法跨膜扩散，滞留率超95%，荧光信号可在活细胞内维持24小时以上，支持长时间动态监测。

主要优势

- 检测精度极高：比率法检测精度达±0.05 pH单位，远超单波长探针（±0.2 pH单位），可捕捉细微的细胞内pH波动。

- 生物相容性优异：工作浓度（2-5μM）下对细胞活性、增殖及酸碱调节机制无显著影响，不干扰巨噬细胞吞噬、T细胞活化等生理功能。

- 多平台适配性：无需调整参数即可直接用于荧光显微镜、共聚焦成像、流式细胞仪及微孔板阅读器，适配高通量实验与高分辨率观测。

- 储存稳定性好：固体状态-20℃避光保存稳定，5mM DMSO储备液密封避光储存期长达12个月，减少批次间误差。

应用领域

- 细胞酸碱平衡监测：用于心肌细胞缺氧酸中毒、肾小管上皮细胞碳酸氢盐重吸收等研究，量化Na⁺/H⁺交换体等酸碱调节蛋白活性。

- 药物研发与毒性评估：高通量筛选质子泵抑制剂，通过pH变化评估顺铂等化疗药物对肿瘤细胞的代谢损伤，计算药物IC₅₀值。

- 细胞器功能分析：经靶向修饰（如偶联Tat肽、三苯基膦）后，可检测溶酶体（pH≈4.5-5.5）、线粒体（pH≈8.0）的pH变化，关联细胞器功能损伤。

- 多类型生物样本检测：广泛适用于哺乳动物细胞、动植物组织、细菌及酵母等，监测细胞凋亡、粘附、趋化等过程中的pH变化。

- 病理机制研究：在炎症、缺血再灌注损伤等病理模型中，追踪细胞内pH动态变化，揭示酸碱紊乱与疾病进展的关联。

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注意：本试剂仅供科研使用，不可用于人类药用及食用领域。